猫杯状病毒如何检测?
杯状病毒属RNA病毒,呈球形,有包膜,对RNA的稳定性要求较高。该病毒的基因组包含两个开放阅读框,即ORF1和ORF2,分别编码两个主要结构性蛋白:基质蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)。 两种结构蛋白是构成病毒粒子的主要成份,因此可以通过免疫组化或 western blot 方法来检测。
在诊断试验中常用抗血清为多克隆抗体,以细胞免疫化学染色或 ELIISA、WB 等方法检测咽部分泌物、粪便或角膜分泌物中的病毒抗原。另外也可通过 RT-PCR 方法直接检测病毒 RNA。由于 RNA 病毒容易丢失,并且受到细胞及组织来源的影响,结果可能存在一定的误差;而且 RT-PCR 只能检出含有病毒的细胞,对于潜伏感染的细胞或感染后期的细胞不能检测到病毒颗粒,故需要反复采集样本并进行多次测试才能确定有无感染。
而传统的病毒分离方法则需要持续观察细胞病变现象,大约需要 6 周的时间,操作过程较繁琐且阳性率较低。随着分子生物学技术在兽医领域的应用,出现了一些新的检测技术,如实时荧光 PCR 法等。这些方法具有敏感性高、特异性强、重复性好等特点,可用于确诊猫杯状病毒感染并判定病毒基因型的差异。但是目前尚缺乏统一标准的诊断试剂和诊断工艺,各个实验室所使用的试剂和技术平台不同,造成的结果的可比性较差。